Брусники обыкновенной листья Vaccinii vitis-idaeaе folia
Собранные до начала цветения или после созревания плодов и высушенные листья многолетнего вечнозеленого дикорастущего кустарничка брусники обыкновенной Vaccinium vitis-idaeah.L., семейства вересковых — Ericaceae.
Подлинность
Внешние признаки. Цельное сырье. Смесь цельных или частично измельченных листьев. Листья короткочерешковые, кожистые, эллиптические или обратнояйцевидные, на верхушке притупленные или слабовыемчатые с цельными или слегка зазубренными, завернутыми вниз краями, длиной 7-30 мм, шириной 5-15 мм. При рассмотрении под лупой (10х) или стереомикроскопом (16х) на нижней поверхности листа видны многочисленные темно-коричневые точки (железки). Черешки листьев в поперечном сечении округло-треугольной формы, покрытые волосками.
Цвет листьев сверху зеленый или темно-зеленый, снизу от светло-зеленого до серовато-зеленого с ясно заметными темно-коричневыми точками (железки) изредка с коричневыми, фиолетово-коричневыми или розовато-фиолетовыми пятнами. Запах отсутствует, вкус водного извлечения горький, вяжущий.
Измельченное сырье. Кусочки листьев различной формы и черешков, проходящих сквозь сито 3 мм. При рассмотрении под лупой (10х) или стереомикроскопом (16х) видны кусочки листьев различной формы, на нижней поверхности листьев многочисленные темно-коричневые точки (железки).
Цвет от серовато-зеленого или светло-зеленого до темно-зеленого с ясно заметными темно-коричневыми точками (железки) с редкими коричневыми, фиолетово-коричневыми или розовато-фиолетовыми вкраплениями. Запах отсутствует, вкус водного извлечения горький, вяжущий.
Порошок. Кусочки листьев и черешков, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм. При рассмотрении под лупой (10х) или стереомикроскопом (16х) видны кусочки листьев от серовато-зеленого, светло-зеленого до темно-зеленого с темными точками (железки) с коричневато-зелеными, светло-коричневыми, фиолетово-коричневыми или розовато-коричневыми и коричневыми вкраплениями.
Запах отсутствует, вкус водного извлечения горький, вяжущий.
Микроскопические признаки. Цельное, измельченное сырье. При рассмотрении листа с поверхности должны быть видны клетки верхнего и нижнего эпидермиса со слегка извилистыми боковыми стенками и четко видным утолщением клеточных стенок, на нижнем эпидермисе вокруг железок клетки с почти прямыми стенками; устьица располагаются на нижнем эпидермисе; устьица мелкие, окруженные двумя околоустьичными клетками, смежные клетки которых расположены параллельно устьичной щели (парацитный тип). На нижней стороне листа должны быть железки, состоящие из многоклеточной ножки, постепенно переходящей в овальную многоклеточную головку с коричневым содержимым; простые волоски редкие одноклеточные толстостенные прямые или изогнутые с гладкой или со слабобородавчатой поверхностью; встречаются по жилкам и на черешке; в мезофиле содержатся редкие одиночные призматические кристаллы и друзы оксалата кальция.
Клетки эпидермиса черешка прозенхимной формы. Эпидермис опущен многочисленными одноклеточными прямыми или изогнутыми волосками с толстыми стенками и гладкой или слабобородавчатой поверхностью. Под эпидермисом в три-четыре слоя залегает колленхима.
Проводящая система черешка представлена одним крупным коллатеральным пучком, расположенным в центре. Над флоэмой проводящего пучка залегает группа лубяных волокон.
Порошок. При рассмотрении микропрепарата порошка должны быть видны фрагменты клеток эпидермиса со слегка извилистыми утолщенными боковыми стенками, фрагменты устьиц с 2 околоустьичными клетками, смежные стенки которых расположены параллельно устьичной щели (парацитный тип); фрагменты клеток эпидермиса с железками, состоящими из многоклеточной ножки, постепенно переходящей в овальную многоклеточную головку с коричневым содержимым; волоски простые, толстостенные, прямые или изогнутые с гладкой или слабобородавчатой поверхностью или их фрагменты; фрагменты мезофилла с друзами и одиночными призматическими кристаллами оксалата кальция. В микропрепарате также обнаруживаются фрагменты черешка листа.
Определение основных групп биологически активных веществ
1. Тонкослойная хроматография
Раствор стандартного образца (СО) арбутина. Около 0,01 г СО арбутина помещают в колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 8,0 мл спирта 70% и нагревают на водяной бане до полного растворения. Затем раствор охлаждают, доводят объем раствора тем же спиртом до 10 мл и перемешивают. Срок годности раствора 3 мес.
На линию старта аналитической хроматографической пластинки со слоем силикагеля на алюминиевой подложке, размером 10×15 см наносят 60 мкл (0,06 мл) испытуемого раствора (см. раздел «Количественное определение арбутина», раствор А; 10 мл раствора А пропускают через колонку с алюминия оксидом нейтральным для хроматографии и используют для хроматографирования), рядом наносят 10 мкл (0,01 мл) раствора СО арбутина. Пластинку с нанесенными пробами сушат на воздухе в течение 5 мин, помещают в камеру, предварительно насыщенную в течение не менее 30 мин смесью растворителей: этилацетат-кислота муравьиная — вода (88:6:6) и хроматографируют восходящим способом.
Когда фронт растворителей пройдет около 80-90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей, обрабатывают натрия фосфорномолибдата раствором 10%, выдерживают в сушильном шкафу при температуре 100-105°С в течение 10 мини просматривают при дневном свете.
На хроматограмме раствора СО арбутина должна обнаруживаться зона адсорбции синего цвета.
На хроматограмме испытуемого раствора должна обнаруживаться зона адсорбции синего цвета на уровне зоны арбутина и 2 зоны адсорбции синего цвета ниже и выше арбутина; допускается обнаружение дополнительных зон адсорбции.
Около 0,5 г сырья, измельченного до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм, помещают в колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 10,0 мл воды и кипятят в течение 2-3 мин, затем фильтруют через бумажный фильтр.
К 1 мл фильтрата (в фарфоровой чашке) прибавляют 4,0 мл раствора аммиака и по каплям 1,0 мл натрия фосфорномолибдата раствор 10%; должно наблюдаться синее окрашивание (арбутин).
К 2 мл фильтрата (в фарфоровой чашке) прибавляют 0,1 мл железа(III) аммония сульфата раствора 1%; должно наблюдаться зеленовато-черное окрашивание (дубильные вещества).
Испытания
Влажность. Цельное сырье, измельченное сырье, порошок — не более 13%.
Зола общая. Цельное сырье, измельченное сырье, порошок — не более 7%.
Зола, не растворимая в хлористоводородной кислоте. Цельное сырье, измельченное сырье, порошок — не более 0,5%.
Измельченность сырья. Цельное сырье: частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 3 мм, — не более 2%. Измельченное сырье: частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями размером 3 мм, — не более 5%. Частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,18 мм, — не более 5%. Порошок: частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм, — не более 5%; частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,18 мм, — не более 5%.
Листьев почерневших и потемневших с обеих сторон. Цельное сырье — не более 7%.
Кусочков почерневших и потемневших листьев. Измельченное сырье, порошок — не более 7%.
Других частей растения. Цельное сырье — не более 1%.
Органическая примесь. Цельное сырье, измельченное сырье — не более 1%.
Минеральная примесь. Цельное сырье, измельченное сырье, порошок — не более 0,5%.
Тяжелые металлы и мышьяк. В соответствии с требованиями ОФС » Определение содержания тяжелых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах «.
Радионуклиды. В соответствии с требованиями ОФС » Определение содержания радионуклидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах «.
Микробиологическая чистота. В соответствии с требованиями ОФС » Микробиологическая чистота «.
Количественное определение. Цельное сырье, измельченное сырье, порошок: содержание арбутина — не менее 4,5%, экстрактивных веществ, извлекаемых водой, — не менее 18%.
Приготовления раствора СО арбутина. Около 0,1 г (точная навеска) СО арбутина помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 80 мл спирта 70% и нагревают на водяной бане до полного растворения. Затем раствор охлаждают, доводят объем тем же спиртом до метки и перемешивают (раствор А СО арбутина). Срок годности раствора 3 мес.
7,0 мл раствора А СО арбутина помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят спирта 70% до метки и перемешивают (раствор Б СО арбутина).
Аналитическую пробу сырья измельчают до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм.
Около 0,5 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в колбу со шлифом вместимостью 250 мл, прибавляют 100,0 мл спирта 70% и взвешивают с погрешностью г. Колбу присоединяют к обратному холодильнику, нагревают на кипящей водяной бане в течение 45 мин, периодически встряхивая для смывания частиц сырья со стенок. Затем колбу с содержимым охлаждают до комнатной температуры, взвешивают и при необходимости доводят до первоначальной массы спиртом 70%. Извлечение фильтруют через бумажный фильтр, смоченный тем же спиртом, отбрасывая первые 10,0 мл фильтрата (раствор А испытуемого раствора).
Для очистки полученного извлечения от сопутствующих веществ, 3 мл раствора А испытуемого раствора пропускают через стеклянную хроматографическую колонку диаметром 1,5 см и высотой 25 см, заполненную 3,0 г алюминия оксида нейтрального для хроматографии (L 40/250 мкм), предварительно промытую 5 мл спирта 70%. Колонку элюируют 15,0 мл спирта 70%. Элюат собирают в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объем раствора спиртом 70% до метки и перемешивают (раствор Б испытуемого раствора).
Оптическую плотность раствора Б испытуемого раствора измеряют на спектрофотометре при длине волны 285 нм в кювете с толщиной рабочего слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют спирт 70%, который предварительно пропускают через колонку с алюминия оксидом.
Параллельно измеряют оптическую плотность раствора Б СО арбутина. В качестве раствора сравнения используют спирт 70%.
Содержание арбутина в абсолютно сухом сырье в процентах (Х) вычисляют по следующей формуле:
,
где: А — оптическая плотность раствора Б испытуемого раствора;
— оптическая плотность раствора БСО арбутина;
— навеска сырья, г;
— навеска СО арбутина, г;
Р — содержание основного вещества в СО арбутина, %.
Допускается содержание арбутина в сырье вычислять с использованием удельного показателя поглощения по следующей формуле:
,
где А — оптическая плотность раствора Б испытуемого раствора;
— удельный показатель поглощения арбутина, равный 72,23;
— навеска сырья, г;
Определение экстрактивных веществ, извлекаемых водой, проводят в соответствии с требованиями ОФС » Определение содержания экстрактивных веществ в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах » (навеска сырья — 1,0 г, экстрагент — вода очищенная).
Примечание. Определение арбутина проводят в сырье, предназначенном для производства лекарственных растительных препаратов (пачка, фильтр-пакеты), экстрактивных веществ, извлекаемых водой в сырье, предназначенном для производства экстрактов.
Упаковка, маркировка и транспортирование. В соответствии с требованиями ОФС » Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов «.
Хранение. В соответствии с требованиями ОФС » Хранение лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов «.
Источник